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Byrne comenzó su carrera protagonizando varias producciones australianas de televisión mientras perfeccionaba su arte con el Australian Theatre for Young People. Ha aparecido en los escenarios de la prestigiosa Sydney Theatre Company con La Dispute y Las tres hermanas.En 1999, Rose saltó a la fama en Australia por su papel de Alex en la comedia negra de Gregor Jordan Two Hands, que también protagonizó un entonces relativamente desconocido Heath Ledger. La película fue un gran éxito tanto de público como de crítica.En su siguiente película, Byrne tuvo su primer papel protagonista: la surrealista cinta de La diosa del asfalto de 1967, por la que recibió el premio Copa Volpi como Mejor Actriz en el Festival Internacional de Cine de Venecia de 1999.Byrne se ganó el reconocimiento internacional cuando fue elegida para hacer de la leal doncella de Amidala, Dorme, en la película de George Lucas Star Wars Episodio II: el ataque de los clones. Byrne interpretó después de STAR WARS el papel protagonista de I Capture the Castle, una película inglesa de amor de los años 30 basada en el libro de Dodie Smitha.